荧光定量服务
荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测,并以b-Actin或GAPDH等管架基因作为内参照,对目的基因的表达量进行半定量检测。
科佰生物将根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。
SYBR Green荧光染料法:适用于任何DNA,无需设计探针,采取双标准曲线法,实验周期短,结果重复性好,灵敏度高。
TaqMan荧光探针法:经验丰富的实验技术人员设计探针,对目标基因有高特异性,实验重复性好,相对于SYBR Green法,灵敏度更高。
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项目流程 |
内容 |
价格 |
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抽提样品DNA或RNA |
细胞样品 |
80元/样 |
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组织样品 |
100元/样 |
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引物/TaqMan探针设计与合成 |
优化引物/探针设计与合成(探针法) |
150元/基因 |
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优化引物设计及合成(染料法) |
120元/基因 |
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RT反应 |
RNA反转录成cDNA |
40元/样品 |
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预试验:荧光PCR体系优化 |
确定荧光PCR反应条件 |
500元/基因 |
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标准曲线制作 |
相对定量(不需要) |
标准品为PCR产物:300元 |
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定量(需要) |
标准品为质粒:400元 |
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荧光PCR检测 |
目的基因 |
50元/反应 |
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内参基因 |
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以上技术服务报价为1个目的基因的报价。同一材料的N个目的基因的价格=1个目的基因价格×N × 0.75 |
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1.定量:
定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作3个点以上的标准曲线后,可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行量(起始拷贝数)分析。
2.相对定量(mRNA表达量分析):
基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量,然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的House Keeping Gene,如:GAPDH、b-actin等。通过同时对参比基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
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