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一、原代细胞分离培养介绍
原代细胞(primary cell)是指从生物体获取细胞直接培养。常用的原代细胞分离培养方法有组织块培养和分散组织培养。
组织块培养：是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。
组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。将组织块剪切成小块后，接种于培养瓶，组织小块贴壁24h或更长时间后，细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤，并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理，如：预先涂以鼠尾胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长。
分散组织培养：是将组织块从机体中取出离散成单个细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。分散组织培养也是常用的一种原代细胞培养方法，通常用机械法或化学法将组织块分散为单细胞。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性较好的游离细胞，经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物，或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+，再经机械轻度振荡，使之成为单细胞。
二、注意事项
1. 取材的组织要尽快培养。如若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果组织块很大，应切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。
2. 从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材，可用含500～1000u/ml的青-链霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再作培养。
3. 组织块不易贴壁，可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。
4. 原代培养的1～2d内要特别注意观察是否有细菌、真菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除。
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